Teclas de Ayuda de acceso Rápido

ALT + 1 Inicio

ALT + 2 Noticias

ALT + 3 Mapa de sitio

ALT + 4 Búsqueda

ALT + 5 Preguntas frecuentes

ALT + 6 Atención al ciudadano

ALT + 7 Quejas y reclamos

ALT + 8 Iniciar Sesión

ALT + 9 Directorio telefónico

Botones de Accesibilidad

Letra:

Contraste:

Esp
lunes, 3 de agosto 2020
03/08/2020
Síguenos

Servicios

Siete pasos para obtener imágenes de biología celular de alta calidad

Juan Carlos Gallego-Gomez. carlos.gallego@udea.edu.co Facultad de medicina Universidad de Antioquia

 

Paso 1

Monte las células de sus experimentos en cristales cubre-objetos dentro de placas multipozos.

Paso 2

Lave las células con Tampón de Preservación1 y luego con el Tampón de Fijación2.

1. Solución isotónica con el medio intracelular tanto en los electrolitos, como pH y osmolaridad.

2. Solución de paraformaldehído preparada en el tampón anterior, que produce una fijación en las condiciones más parecidas a las que estaban las células naturalmente*.
* Orozco-García, E., Trujillo-Correa, A., & Gallego-Gómez, J. C. (2016). Cell Biology of Virus Infection. The Role of Cytoskeletal Dynamics Integrity in the Effectiveness of Dengue Virus.

Paso 3

Permeabilizar3 y bloquear4 con soluciones adecuadas.

1.Solución isotónica con el medio intracelular tanto en los electrolitos, como pH y osmolaridad.

2.Solución de paraformaldehído preparada en el tampón anterior, que produce una fijación en las condiciones más parecidas a las que estaban las células naturalmente*.
* Orozco-García, E., Trujillo-Correa, A., & Gallego-Gómez, J. C. (2016). Cell Biology of Virus Infection. The Role of Cytoskeletal Dynamics Integrity in the Effectiveness of Dengue Virus.

Paso 4

Marcaje con anticuerpos primarios.

El marcaje con los anticuerpos primarios de- penderá de la pregunta de investigación, en lo cual casi que no hay limitaciones, puesto que se tienen anticuerpos comerciales disponibles para casi cualquier proteína celular.

Paso 5

Detección con anticuerpos secundarios y fluoróforos.

La detección dependerá del marcaje primario y las necesidades del investigador Para el caso de esta imagen, hemos revelado la proteína del virus, usando un anticuerpo secundario conjugado a un fluoróforo, que emite fotones en verde (Alexa- fluor-488).

Los microfilamentos de actina fueron revelados, usando Phalloidin conjugada a Alexa-fluor-594, que fluoresce en rojo. Y el núcleo se detectó con Hoechst, que fluoresce en el espectro azul.

Paso 6

Observación y captura de las imágenes mas representativas.

La observación y captura de las imágenes en el Microscopio Avanzado de Fluorescencia o en el Confocal de Disco Giratorio (imagen arriba), varían de acuerdo a las necesidades

La mayoría de estudios sobre distribución subcelular de una o varias proteínas, pueden hacerse con alta calidad en el Microscopio de Fluorescencia, como en la siguiente imagen.

Paso 7

Editar y cuantificar los hallazgos más importantes de las imágenes para publicar.

La edición de las imágenes es un proceso esencial, donde se escogen los aspectos más importantes de los hallazgos (ROI. Region of Interest), que tendrán que ser cuantificados en pixeles.

Las fotos de ambos microscopios arrojan una serie de parámetros cuantitativos, que son claves para obtener las representaciones más objetivas de lo observado.

Las cuantificaciones dirigidas a aspectos específicos del fenómeno en estudio, serán clasificadas para ser sometidas al proceso de cuantificación. 

 

54d4db3244a5e15c6a21152b_logo-renata.png
54d4db5924c957e253bd5fa5_logo-ruana.png
54d4db63ae77e15e6afe94a0_logo-universia.png
54d4db6add1988d75368ecff_logo-icetex.png
54d4db7744a5e15c6a211531_logo-colombiaprende.png
54d4db7edd1988d75368ed05_logo-gobiernolinea.png
54d4db86dd1988d75368ed09_logo-canalu.png
54d4db9644a5e15c6a211534_logo-cis.png
54d4db9d44a5e15c6a211535_logo-colciencias.png
54d4dba444a5e15c6a211539_logo-ips.png
Sistema Único de Información de Trámites - SUIT
54d4dbb7ae77e15e6afe94a4_logo-redemprendia.png
54d4dbbfdd1988d75368ed14_logo-colombia.png
Fundación Universidad de Antioquia
No + filas
No + filas
No + filas
ORACLE
Hacemos Memoria
Universidad de Antioquia | Vigilada Mineducación | Acreditación institucional hasta el 2022 | NIT 890980040-8
Recepción de correspondencia: calle 70 No. 52 - 21 | Apartado Aéreo 1226 | Dirección: calle 67 No. 53 - 108 | Horario de atención
Conmutador: [57+4] 219 8332 | Línea gratuita de atención al ciudadano: 018000 416384 | Fax: [57+4] 263 8282
Peticiones, quejas, reclamos, sugerencias, denuncias, consultas y felicitaciones
Política de tratamiento de datos personales
Medellín - Colombia | Todos los Derechos Reservados © 2020